哺乳动物细胞表达与纯化

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哺乳动物细胞表达与纯化

原核表达系统具有表达水平高、操作简单、周期短、易于大规模高密度培养、成本低等优点，而对于全抗体和糖蛋白类生物药物来说，表达产物多肽链的折叠、二硫键的形成、糖基化的有无以及糖基化的类型常常影响表达产物的合成分泌、生物活性、体内稳定性以及免疫原性等特性。由于原核细胞缺少内质网和高尔基体等可用于进行糖基化的结构和机制，所表达产物是非糖基化的，且常以包涵体的形式存在；酵母、昆虫及植物等真核细胞虽能进行糖基化，但其糖基化的方式与人类等哺乳动物细胞糖基化的方式是不一样的。与其它真核细胞表达系统相比，目的基因在哺乳动物细胞中表达的蛋白与天然蛋白的结构、糖基化类型和方式几乎相同且能正确组装成多亚基蛋白，并且哺乳动物细胞能以悬浮培养或在无血清的培养基中达到高密度且培养体积能达到1000L 以上。总之，与其他系统相比，哺乳动物细胞表达系统的优势在于能够指导蛋白的正确折叠，提供复杂的N型糖基化和准确的O型糖基化等多种翻译后加工功能，因而表达产物在分子结构、理化性质和生物学功能方面最接近于天然的高等生物蛋白质分子。

服务优势

服务项目	特点优势
表达载体构建	细胞瞬时转染（磷酸钙法、脂质体法、电穿孔法）：表达周期短，蛋白活性高；可提供详细的实验数据和纯化产物。稳定转染细胞系（抗生素筛选）：可以让外源基因持续表达，蛋白活性高；可提供详细的实验数据、纯化产物和稳定表达的细胞株。
表达条件优化
蛋白表达与纯化

服务类型

哺乳动物细胞瞬时转染表达

实验项目	实验流程	交付内容	时间
原核克隆	基因的获得	核酸电泳图片	2周
	PCR扩增产物酶切连接到本公司改造过的pcDNA3.1或psv2-dhfr载体
	转化DH5α
	重组质粒大量制备
瞬时转染表达	细胞传板并培养待细胞长满板孔底部70%~80%，进行转染 48~72小时收获细胞	细胞转染的实验数据	3~4天
蛋白表达与纯化	通过western blot 检测	western blot印记	4周
蛋白表达与纯化	纯化表达产物	1L上清的纯化产物	4周

哺乳动物细胞稳定表达

实验项目	实验流程	交付内容	时间
原核克隆	基因的获得	核酸电泳图片	2周
	PCR扩增产物酶切连接到本公司改造过的pcDNA3.1或psv2-dhfr载体
	转化DH5α
	重组质粒大量制备
细胞的稳定表达	转染后用抗生素筛选，建立稳定表达细胞系	细胞转染的实验数据和稳定表达的细胞株	3~5个月
蛋白表达与纯化	通过western blot 检测	western blot印记	2周
蛋白表达与纯化	纯化表达产物	1L上清的纯化产物	2周